Întârziere ciclul menstrual
Dr. Ioan Boleac Medic primar obstetrica-ginecologie

Nu inteleg in ce privinta imi cereti sfatul. Nu are legatura frecventa contactelor sexuale... citește

Cele mai
Caută în:

Electroforeza hemoglobinei

Cuprins
Informatii generale
Recomandari pentru efectuarea electroforezei de hemoglobina
Recoltarea
Metoda si interpretarea rezultatelor
Limite si interferente
sus

Informatii generale

Hemoglobina reprezinta elementul esential pentru principala functie fiziologica a eritrocitului: functia respiratorie.

Hemoglobina este o cromoproteina porfirinica care contine fier, in structura sa intrand o parte proteica – globina – si o parte prostetica – hemul. Globina difera ca structura de la o hemoglobina la alta, ea imprimand specificitate diverselor hemoglobine cunoscute.

In cursul dezvoltarii organismului de la embrion la adult se succeda mai multe tipuri de Hb; hemoglobinele embrionare Gower 1, Gower 2 si Portland sunt inlocuite incepand cu cea de-a 3-a luna de gestatie de catre Hb fetala (HbF), care reprezinta 70-80% din totalul Hb la nou-nascut, dupa care sinteza sa scade rapid, ajungand la sfarsitul primului an de viata la valori sub 2% din totalul Hb. Hb A si Hb A2 sunt caracteristice perioadei adulte de dezvoltare; sinteza lor incepe inca  din perioada fetala, iar dupa nastere ele inlocuiesc rapid Hb F.

La adultul normal, Hb A reprezinta 97-98%, HbA2 2-3%, iar HbF sub 1%2.

Hb A este caracterizata in mod obisnuit prin mobilitatea sa electroforetica, prin afinitatea pentru O2 si prin viteza de denaturare in mediul acid si alcalin.

Hb F se caracterizeaza prin rezistenta crescuta la denaturarea alcalina, proprietate pe care se bazeaza si determinarea ei chimica, si prin afinitate crescuta la O2 in raport cu Hb A. Valori crescute de Hb F fata de normal se gasesc in diverse situatii fiziologice sau patologice: sarcina, anemii severe diverse, anemie Biermer, leucemii, hipertiroidie, persistenta ereditara de Hb F, β- talasemia hetero- si homozigota, alte hemoglobinopatii.

Hb A2 poate fi usor separata electroforetic de Hb A intrucat are o mobilitate electroforetica evident mai lenta decat a Hb A4.
Principiul metodei

Intr-un camp electric particulele incarcate cu o anumita sarcina electrica se deplaseaza in functie de intensitatea campului electric, de incarcarea lor electrica, de marimea si forma moleculei. In cazul hemoglobinelor anormale modificarea structurala duce la modificarea sarcinii electrice, ceea ce  permite migrarea si separarea lor electroforetica.

Electroforeza de Hb la un pH alcalin (8.2-8.6) folosind ca suport de migrare gelul agar este o metoda rapida si sensibila, permitand separarea Hb fiziologice si patologice, inclusiv a fractiilor minore3. La acest pH, hemoglobina prezinta o sarcina electrica negativa si va migra catre anod. La rularea fiecarui set de probe este folosit un control ce contine hemoglobinele A, F, S si C. Deoarece este utilizata o coloratie pentru proteine si nu una pentru hem, anhidraza carbonica (enzima cu un continut crescut in eritrocite) va fi vizualizata suplimentar in spatele benzii A2 (vezi figura 8.1.1)1;3.

sus

Recomandari pentru efectuarea electroforezei de hemoglobina

Diagnosticul hemoglobinopatiilor si sindroamelor talasemice a caror suspiciune este indicata de:

• anemie hemolitica cronica;

• criza ocluziva vasculara de cauza necunoscuta la un pacient provenit din zone cu niveluri crescute ale Hb S si/sau Hb C;

• sindrom de hidrops fetal de cauza necunoscuta1;

• aspect sugestiv al hemogramei, cu microcitoza si hipocromie mai severe decat ar fi de asteptat pentru gradul anemiei si numar de eritrocite la limita superioara a normalului sau chiar crescut, asociate cu un numar mare de hematii „in tinta” si punctatii bazofile pe frotiul de sange. In aceasta situatie, pentru diferentierea de deficitul de fier, sunt utile indicele Mentzer si indicele RDW:

Indicele Mentzer = VEM/nr. de eritrocite (x106)
                        >14       sugestiv pentru deficit de fier;
                        12-14    echivoc
                        <12       sugestiv pentru tara talasemica.

Indicele RDW = Indicele Mentzer x RDW (largirea distributiei eritrocitare).
                          < 220:    sugestiv pentru talasemie;
                          ≥ 220:    sugestiv pentru anemia feripriva5.

sus

Recoltarea

Pregatire pacient - à jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese)3.

Specimen recoltat - sange venos3.

Cauze de respingerea probei - specimen coagulat3.

Recipient de recoltare - vacutainer cu K3 EDTA3.

Cantitate recoltata - cat permite vacuumul3.

Prelucrare necesara dupa recoltare - Sangele se centrifugheaza. Eritrocitele se separa si se spala cu ser fiziologic. Apoi, ele sunt hemolizate folosind reactivul hemolizant din kit. Hemolizatul se supune electroforezei imediat; eventual, el poate fi pastrat la 2-8°C. Sangele integral si eritrocitele spalate, de asemenea, pot fi pastrate la 2-8°C. In nici un caz vacutainerul cu sange recoltat pe K3 EDTA nu se introduce in congelator!!! (se produce hemoliza)3.

Stabilitate proba - sangele integral este stabil 28 zile la 2-8°C2; eritrocitele spalate sunt stabile 28 zile la 2-8°C2; hemolizatul este stabil 36 ore la 2-8°C3.

sus

Metoda si interpretarea rezultatelor

Metoda - electroforetica urmata de  scanarea densitometrica a fractiunilor obtinute3.

Valori de referinta – fractie  A:  >95%; fractie A2: 1.5-3.5%; fractie F: <2% .

Prin electroforeza hemoglobinei pot fi detectate fractiuni normale sau patologice, pozitia benzilor obtinute fiind comparata cu cea a benzilor standard furnizate de materialul de control.

Interpretarea rezultatelor

• in β-talasemia minima si minora valorile  Hb A2  sunt crescute (3,2%- 7%), iar Hb F este usor crescuta (0.5-6%) in peste 50% din cazuri, restul fiind reprezentat de Hb A;

• in β-talasemia intermedia, procentul de Hb A2 este variabil, iar Hb F = 20-80%;

• in β-talasemia majora, valorile de  Hb F sunt foarte crescute, situate obisnuit intre 20-90% din totalul Hb, restul fiind format de  Hb A (valori foarte scazute) si HbA2 (valori normale sau crescute); se caracterizeaza clinic prin tabloul clasic al anemiei Cooley;

• in afara de tipurile amintite, mai exista forme de β-talasemie cu valori normale de Hb A2 si Hb F  (“silent thalassemia” cu indici eritrocitari normali si “almost silent thalassemia” cu indici eritrocitari modificati) care pot fi puse in evidenta prin tehnici de genetica moleculara1;4;

• δβ-talasemia rezulta din deletia genelor δ si β cu mentinerea integritatii genelor γ, in timp ce in Aγδβ-talasemia se inregistreaza deletia genelor Aγ, δ si β cu mentinerea integritatii genei Gγ; heterozigotii prezinta un tablou hematologic similar β-talasemiei minore dar la electroforeza Hb, procentul de Hb A2 tinde sa fie redus la jumatate iar Hb F este persistent crescuta intr-o proportie de 5-20%; homozigotii prezinta un fenotip similar β-talasemiei intermedia iar electroforeza evidentiaza Hb F intr-un procent de aproape 100%; testarea genetica confirma diagnosticul1;

• Hb Lepore este o hemoglobina anormala, in care lanturile α sunt normale, iar lanturile non-α au o structura asemanatoare lanturilor δ la capatul N-terminal si lanturilor β la capatul C-terminal. Sindromul Lepore, foarte asemanator clinic, in forma sa heterozigota, cu  β-talasemia minora , se caracterizeaza electroforetic prin prezenta Hb Lepore intr-un procent de 5-10 %, cu migrare asemanatoare HbS si scaderea procentului de Hb A2; in forma homozigota, asemanatoare clinic cu anemia Cooley,  Hb Lepore reprezinta 10-20%, restul fiind format de HbF (Hb A si Hb A2 lipsesc in totalitate)2;

• persistenta ereditara de Hb F este o entitate asimptomatica clinic si hematologic, caracterizata prin valori crescute de Hb F, la heterozigoti Hb F = 15-30%, iar la homozigoti se poate ajunge pana la 100% Hb F, in afara oricarui semn de boala4;

• in forma heterozigota de siclemie (“sickle cell trait”) , electroforeza Hb sugereaza diagnosticul, punand in evidenta o Hb anormala, Hb S, in proportie de 25-45%, Hb A2 fiind in cantitate normala, iar restul fiind reprezentat de Hb A; confirmarea diagnosticului de siclemie se face prin testul de siclizare; cei mai multi pacienti cu tara de siclemie sunt asimptomatici, cu un frotiu de sange normal sau usor modificat (microcitoza sau hematii “in tinta”); coexistenta tarei Hb S cu anumite tipuri de talasemii sau alte hemoglobinopatii modifica tabloul clinic si hematologic precum si electroforeza Hb; in cazul obtinerii unei benzi cu migrare similara Hb S dar cu test de siclizare negativ va fi suspectata o Hb D sau G1;

• in forma homozigota de siclemie (“sickle cell anemia”), electroforeza Hb indica prezenta Hb S in proportie de 90-95%, restul fiind reprezentat de Hb A2 si Hb F; tabloul hematologic este normal la nastere si incepe sa se modifice dupa varsta de 6 luni, pe masura ce Hb F este inlocuita de Hb S1;

• in hemoglobinopatia C, la electroforeza Hb in mediu alcalin, HbC se izoleaza  ca o fractie anormala, cu migrare foarte lenta, pe linia Hb A2, in aceeasi pozitie  cu Hb E si Hb OArabia, in valori procentuale de 38-44% la heterozigoti2; pentru diferentierea Hb C de Hb E si Hb OArabia este necesara efectuarea electroforezei la un pH acid (6-6.2); prezenta tarei Hb C nu prezinta semnificatie clinica insa este importanta in consilierea genetica a cuplurilor; homozigotii pentru Hb C (boala hemoglobinei C) prezinta urmatoarele caracteristici: anemie usoara/medie cu microcitoza marcata, numeroase hematii “in tinta” pe frotiul de sange periferic, iar la electroforeza hemoglobinei se izoleaza Hb C in proportie de 95%, restul fiind reprezentat de Hb A2 si Hb F1;

• in α- talasemia minora  nu exista modificari procentuale ale Hb A, Hb A2  si Hb F, iar electroforeza de Hb apare normala la subiectul adult heterozigot; insa dublu heterozigotii realizeaza “boala Hb H”, cu aspect clinic de talasemie intermedia, iar la electroforeza Hb la pH alcalin se poate evidentia  o fractiune anormala cu migrare rapida (cea mai apropiata de anod) corespunzatoare Hb H (5-30%)2. Genetica moleculara asigura insa diagnosticul de certitudine al tuturor formelor de α- talasemie1.

 

sus

Limite si interferente

Transfuziile de sange pot dilua o eventuala hemoglobina anormala, pentru o perioada de 3-4 luni, interferand cu rezultatele electroforezei4.

Hiposideremia poate determina obtinerea de valori fals scazute pentru Hb A2; daca exista o neconcordanta intre rezultatul obtinut pentru HbA2 si suspiciunea clinica de betatalasemie minor, pacientul va fi tratat cu fier, pana la normalizarea sideremiei, apoi se va repeta electroforeza de hemoglobina2.

• Interferente analitice

- Centrifugarea ineficienta si/sau spalarea eritrocitelor cu solutii saline nu vor furniza o hemoliza clara. Aceasta poate rezulta in prezenta liniei rosii la aplicarea punctelor pe banda, ceea ce indica o calitate slaba a pattern-ului electroforetic.

- Probele inghetate pot produce benzi false langa cea a HbA3.

 

Sursa:
Analize medicale de laborator si dictionar medical online, Synevo

Bibliografie

1. Barbara J. Bain. Haemoglobinopathy Diagnosis. Blackwell Science, 2001, 20-25.

2. Dan Colita. Hematologie. In Tratat de medicina interna. 1997, 759-802.

3. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.

4. Lothar Thomas. Hemoglopinopathies. In Clinical Laboratory Diagnostics-Use and Assessment of Clinical Laboratory Results. TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt /Main, Germany, 1 ed., 1998; 489-493.

5. Bertil Glader. Anemia: General Considerations.In Wintrobe`s Clinical Hematology. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 11th edition, 2004, 962.

Citește și:
Vitamina B12
Glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza (G6-PDH)
Receptorul solubil pentru transferina

Toate materialele si sfaturile furnizate prin intermediul CSID.ro trebuie vazute ca simple informatii si nu ca analize si sfaturi medicale complete. CSID.ro nu isi propune sa inlocuiasca consultul medical de specialitate. Utilizatorii nu trebuie sa isi fundamenteze actiunile viitoare pe sfaturile furnizate de CSID.ro, pentru ca intotdeauna diagnosticul medical necesita consultarea in persoana a unui medic specialist. Toata informatia prezentata pe site este furnizata fara nici un fel de garantie, expresa sau sugerata. Informatia prezentata poate include inacurateti de ordin tehnic sau erori de tastat. Informatiile acestui site va sunt oferite cu buna credinta, din surse apreciate ca fiind de incredere.



Sursă: Laboratoarele Synevo România
Cele mai citite din Analize medicale din ultimele 7 zile
  • Testul de paternitate

    Testul de paternitate este un test genetic prin care se stabileste daca...

  • Fibromax

    Investigatia FibroMax, dezvoltata de BioPredictive, constituie o combinatie...

  • Sideremie

    Cantitatea totala de fier din organism difera in functie de varsta si...

  • Anti-HBs(cantitativ)

    Hepatita virala B se vindeca in totalitate la 90% dintre pacienti in decurs...

  • Coprocitograma

    Coprocitograma este o tehnica uzuala, care stabileste un diagnostic prezumtiv...

  • Vitamina D3 (1,25-(OH)2-Vitamina D3)

    Vitaminele D sau calciferolii sunt sintetizate din provitamine prin clivajul...

Berbec Berbec 21 martie - 20 aprilie

Vă atrag foarte mult distracţiile şi v-aţi propus să nu pierdeţi niciun prilej în a le dovedi celorlaţi că ştiţi să trăiţi. Pe plas socio-profesional se bun ale baze ale evoluţiei dumneavoastră...citește mai departe

×

Zf.ro
Mutare fulger: Un miliardar român construieşte cel mai nou mall din Capitală, în unul dintre cele mai ”de lux” cartiere Mutare fulger: Un miliardar român construieşte...
Oraşul din România care se transformă...
V-aţi pregătit conturile? ANAF începe...
BusinessMagazin.ro
Care este primul oraşul din România care poate intra în FALIMENT. Motivul este absolut RIDICOL Care este primul oraşul din România care...
Cine este femeia care pleacă la cumparaturi...
Cum a reuşit o tânără de 23 de ani să...
Mediafax.ro
GAFĂ de proporţii la British Airways: Un pilot a GREŞIT "drumul" şi a aterizat la peste 1.000 Km distanţă de destinaţie/ Este UIMITOR ce le-a spus călătorilor GAFĂ de proporţii la British Airways:...
VIDEO - Operaţiune ca în filme, pe străzile...
ISTORIC VEHICUL: Aplicaţie RAR prin care...
Gandul.info
Şi-a convins soţia să-i permită AMANTEI mai tinere să vină la ei acasă, pentru o noapte de neuitat în 3. Au băut, au vorbit şi s-au iubit... La un moment dat, nevasta a plecat la baie, iar ce a urmat este TERIFIANT Şi-a convins soţia să-i permită AMANTEI...
Această jurnalistă a mers să îi ia un...
Au chemat preotul la o femeie muribundă,...
ProSport.ro
Poza care a declanşat un scandal naţional! Ipostaza în care a fost surprinsă această tânără, motiv de reacţii sexiste şi jignitoare. Femeia a recunoscut: “Gândiţi-vă la asta, animalelor” Poza care a declanşat un scandal naţional!...
“Respect DNA” şi jigniri la adresa...
Jucătoarea română care face ravagii în...
ApropoTv.ro
Destinaţii alternative de Crăciun care te fac să vezi cu alţi ochi Europa Destinaţii alternative de Crăciun care...
Jurnalistul Ion Cristoiu publică două...
Electric Castle Festival anunţă headliner-ii...
Go4it.ro
Cât costă Huawei P30 Pro, telefonul cu cea mai performantă CAMERĂ FOTO din lume. Zoom 10X şi mod nocturn într-un telefon impresionant Cât costă Huawei P30 Pro, telefonul cu...
Tehnologia care îţi încarcă telefonul...
NETFLIX la jumătate de preţ! Compania...
ProMotor.ro
Cutie manuală vs. cutie automată. AVANTAJE ŞI DEZAVANTAJE Cutie manuală vs. cutie automată. AVANTAJE...
Maşini second hand aduse din GERMANIA,...
PRIMA ŢARĂ unde toate taxiurile vor fi...
Descopera.ro
SPERMĂ bătrână, de calitate bună. Savanţii australieni au realizat un EXPERIMENT apartent BIZAR. Rezultatele au fost însă ULUITOARE SPERMĂ bătrână, de calitate bună. Savanţii...
Cine a fost în realitate Jack Spintecătorul,...
SECRETUL ascuns în Biblie, descifrat după...
ULTIMA ORĂ
DEZBRĂCATĂ pentru o cauză nobilă? Cum a ales un ministru să facă un spot publicitar cu FOTO de tip NUD: „Arată ca naiba, dar îmi salvează viaţa”

Citarea se poate face în limita a 250 de semne. Nicio instituţie sau persoană (site-uri, instituţii mass-media, firme de monitorizare) nu poate reproduce integral scrierile publicistice purtătoare de Drepturi de Autor fără acordul Mediafax Group.